【推荐】重组蛋白失活的原因以及如何保存？

我们体外表达蛋白过程经常会遇到蛋白失活的现象，蛋白质失活受多种因素影响，除了与蛋白本身特性外，储存条件也是关键。

比如温度，水，PH，离子强度，保存时间以及容器等，不合适的储存条件会造成蛋白聚合，重要氨基酸的变化比如二硫键还原，肽键水解，氨基酸消旋，色氨酸，甲硫氨酸的氧化等，所以合适的保存条件对蛋白的稳定性至关重要，下面具体介绍几种常用的保存方法。

目前蛋白保存以液体保存和冻干保存为主。因蛋白不同维持蛋白稳定选择措施不同。

液体保存

选择液体保存可以从温度，pH,蛋白浓度以及保护剂添加几个因素考虑。

温度：一般蛋白质低温保存，短期可以4℃保存，长期可以储存于-20℃或-70℃，用时迅速融化。

pH：大多数蛋白质在较窄PH范围稳定，一般在等电点附近，可调整合适pH范围保存。

蛋白浓度：液体蛋白质受水化影响，保存浓度不易过低，过低浓度会造成多亚基蛋白和辅助因子解离，变性，聚集沉淀，需要调整合适的蛋白浓度。

保护剂添加：长期保存蛋白（酶类）常常加入某些稳定剂，比如糖类，多元醇（甘油），多糖，氨基酸及其衍生物。还有一类离子稳定剂如盐类

冻干保存

制成干粉或结晶冻干是将溶剂或悬浮介质在低温下冷冻，然后将其由固态直接升华为气态的一种干燥方法。该方法能够很好地保持物质骨架的稳定性，并且在复融后也不改变。

冻干一般包括三个过程：预冻结、升华干燥、解析干燥。

尽管冻干能够较好的维持蛋白的稳定性，但是在冻干过程中添加必要的稳定剂以防止蛋白质的变性尤为重要，这其中以非还原型的海藻糖和蔗糖对蛋白质的保护最有效。冻干过程应该避免使用还原型糖，如葡萄糖，麦芽糖，乳糖等，其会引起美拉德（Maillard）反应降解蛋白质。因此在冷冻干燥过程中选择合适的保护剂。

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参考文献

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