Protein A磁珠Protein G磁珠Protein L磁珠Protein A/G磁珠Protein A琼脂糖凝胶Protein G琼脂糖凝胶Protein L琼脂糖凝胶Protein A/G琼脂糖凝胶Anti-HA磁珠Anti-Myc磁珠Anti-DYKDDDDK磁珠(原Flag磁珠)链霉亲和素磁珠Anti-DYKDDDDK琼脂糖凝胶(原Flag凝胶)Anti-GST磁珠Anti-His磁珠Anti-GFP磁珠伴刀豆蛋白A(ConA)磁珠Protein A琼脂糖磁珠Protein G琼脂糖磁珠Protein A/G琼脂糖磁珠免疫沉淀磁珠His蛋白纯化琼脂糖凝胶GST蛋白纯化琼脂糖凝胶His蛋白纯化琼脂糖磁珠GST蛋白纯化琼脂糖磁珠Protein A Plus 琼脂糖磁珠Protein G Plus 琼脂糖磁珠Protein A/G Plus 琼脂糖磁珠蛋白抗体纯化磁珠PCR产物提取磁珠Oligo-dT包被磁珠核酸提取纯化磁珠羟基磁珠氨基磁珠羧基磁珠醛基磁珠NHS磁珠基础磁珠Protein A免疫(共)沉淀试剂盒Protein G免疫(共)沉淀试剂盒经典Protein A/G免疫(共)沉淀试剂盒Anti-HA免疫(共)沉淀试剂盒Anti-Myc免疫(共)沉淀试剂盒Anti-DYKDDDDK免疫(共)沉淀试剂盒Anti-DYKDDDDK免疫(共)沉淀试剂盒(凝胶法)Anti-GST免疫(共)沉淀试剂盒Anti-His免疫(共)沉淀试剂盒Anti-GFP免疫(共)沉淀试剂盒基础免疫(共)沉淀试剂盒His Pull-down试剂盒GST Pull-down试剂盒分子互作试剂盒His标签蛋白纯化试剂盒GST标签蛋白纯化试剂盒蛋白纯化试剂盒mRNA纯化试剂盒基础mRNA纯化试剂盒核酸提取纯化试剂盒生物配体快速偶联试剂盒生物偶联试剂盒血浆/血清外泌体提取试剂盒(磁珠法)细胞上清外泌体提取试剂盒(磁珠法)尿液外泌体提取试剂盒(磁珠法)外泌体研究产品双排4孔 1.5mL磁力架双排8孔 1.5mL磁力架双排16孔 1.5mL磁力架双排4孔 15mL磁力架双排4孔 50mL磁力架八联排 0.2mL磁力架(PCR)双排八孔1.5mL磁力架(铝合金款)双排十六孔1.5mL磁力架(铝合金款)96孔PCR板磁力架(铝合金款)96孔酶标板磁力架(铝合金款)手持均质仪配套设备生物偶联技术高通量蛋白纯化外泌体定向改造IVD试剂研发服务磁珠应用外泌体专题纳米抗体神经科学领域新冠相关PROTAC技术翎因动态行业新闻优惠促销产品支持技术支持客户发表文章学习资源企业简介企业文化团队风采生产与质量联系我们
Lab  on  the Beads

【答疑篇】包涵体蛋白你了解吗?

作者:Biolinkedin

A. 什么是包涵体?

   包涵体是一种不溶的蛋白质形态,往往蛋白在大肠杆菌或其他表达宿主内高水平表达时,由于表达速率过快,部分蛋白部分折叠或错误折叠,会有暴露在外的疏水区与其他结构类似的蛋白形成的聚集物。

B.如何尽量避免形成包涵体?

   1.延缓蛋白表达,可以降低诱导温度或降低IPTG(0.01-0.1mM)并延长诱导时间,或者构建质粒时采用较弱的启动子。

   2.更换标签质粒,比如使用含有GST,TrX,MBP等标签增强蛋白的可溶性。

 

   3.与分子伴侣共表达


C.包涵体如何溶解和复性?

包涵体溶解常用尿素,盐酸胍等变性剂,同时也加入一些SDS,巯基乙醇,DTT等还原剂。

复性一般采用稀释、透析和柱上复性三种方式。


D.包涵体复性如何进行方案设计?

   1.我们要了解蛋白的氨基酸序列,通过分析了解半胱氨酸/胱氨酸含量,二硫键,脯氨酸的占比情况。

   2.确定变性剂和添加剂种类和比例

   3.确定复性的方式

   4.明确处理量,方便复性一致性。

E.做抗体可以用包涵体吗?

   可以,而且不需要复性,可以直接作为抗原。

F.变性的蛋白可以免疫动物制备单抗或多抗吗?

   可以,其实变性蛋白也属于天然蛋白,还是具有很强的抗原性,一般这种得到的抗体检测变性蛋白是没有问题的,但如果检测天然蛋白,可能类似做免疫沉淀可能会出现假阳性。

G.包涵体复性后蛋白还有活性吗?复性效率如何?

   这个需要根据自身蛋白特性和复性的条件决定的。

H.包涵体复性有哪些关键点?

   包涵体复性遵循低浓度,低温,平衡梯度。我们再复性过程中需要注意以下几点:

1.   复性蛋白浓度控制在0.1-1.0mg/mL,不宜过高,高浓度会容易形成聚集体沉淀,有的蛋白低浓度不稳定,容易变性。

2.   保持4度低温状态。

3.   保持最适pH值 8.0-9.0之间。可防止自由硫醇的质子化作用影响正确配对的二硫键。

4.   复性时间控制在24-36h.


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