【重磅推出】Biolinkedin® mRNA纯化试剂盒-15min一站式搞定mRNA

mRNA是由DNA的一条链作为模板转录而来的、携带遗传信息的能指导蛋白质合成的一类单链核糖核酸。真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A）尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志。

Biolinkedin^® Oligo (dT)₂₅磁珠设计用于从真核总RNA或直接从细胞，动植物组织的粗提物中快速分离高度纯化的完整mRNA。分离的mRNA可直接用于大多数下游应用中分子生物学：RT-PCR，固相cDNA文库构建，S1核酸酶分析，核糖核酸酶保护测定，引物延伸，点和槽杂交，体外翻译实验，RACE，减性杂交，northern分析，基因克隆和基因表达分析。

Biolinkedin^® Oligo (dT)₂₅磁珠使用依赖于mRNA的Ploy(A)尾部与磁珠表面的Poly(T)序列之间的碱基互补配对。利用标准杂交条件，可以很容易地将含有Poly(A)的mRNA结合到oligo-dT上面，其他RNA种类(rRNA和tRNA)不包含poly(A)序列，因此不会与oligo-dT磁珠结合。可以在15分钟内完成，而无需准备总RNA或执行任何其他纯化步骤。

特点

1.      快速温和的程序可获得完整的纯 mRNA

2.      高纯 mRNA 分离，cDNA 合成上游的最佳选择

3.      高灵敏度的 mRNA 分离可以用超小量的初始样品合成 cDNA 和构建 cDNA 文库。（可以用单细胞构建 cDNA 文库）

Biolinkedin^® Oligo (dT)₂₅磁珠能特异地靶向并捕获多种粗提初始样品的 mRNA 转录组。弃除不与磁珠结合的核糖体 RNA、DNA、蛋白质和小 RNA 分子（例如转运 RNA、micro RNA 和小核仁 RNA）。只捕获多聚腺苷酸化的 RNA (mRNA)。可分离出纯 mRNA，无需进行核糖体 RNA 消除或提取后的 DNase 处理。

应用领域

l   基因克隆

l   cDNA 合成、cDNA 文库构建

l   RT-PCR、定量 RT-PCR

l   RPA（核糖核酸酶保护试验）

l   消减杂交

l   斑点/狭线杂交

l   引物延伸

成分组成

实验流程

1.     以下实验方案针对纯化75ugTotal RNA，根据需要可以按比例放大。

2.     取50uL含有75ug Total RNA ,65°C孵育2min，打开RNA二级结构，结束后迅速置于冰上。

3.     将50μL总RNA溶液加入至50μL洗涤后的磁珠,吹打混合均匀。即每75μg总RNA使用1mg洗涤后且溶于50μL结合缓冲液的磁珠结合。

4.     将上述混合液室温下旋转混合10∽15min。

5.     磁性分离，静置1min，去上清。

6.     室温下用200uL洗涤液清洗磁珠，小心吹打混匀，磁性分离，去除可能的污染物。重复操作一次。

7.     加入10～20μL 10mM Tris-HCl pH7.5或RNase-Free H₂O，65∽75°C孵育2min，然后快速将含有mRNA的上清液转移到新的Rnase-free EP管。

Biolinkedin^® Oligo(dT)₂₅磁珠纯化mRNA示意图

Biolinkedin^® Oligo (dT)₂₅纯化试剂盒可应用于mRNA的纯化，通过亲和结合mRNA的poly A尾巴进行纯化，大大简化了mRNA的捕获过程。具有耐受高盐、高pH和高温，使用简单，不需使用任何易燃、有毒的试剂。

实验案例

针对2ug 小鼠Total RNA进行mRNA纯化，以等量初始总RNA为对照，通过Real-time PCR检测以评估mRNA捕获效率。

检测基因：GAPDH

实验结果：

扩增曲线

溶解曲线

CT值

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