一、首个CAR-T+mRNA疫苗治疗实体瘤临床

近日，BioNTech公司在美国癌症研究协会（AACR）2022 年会上公布了其CAR-T疗法BNT211作为单药治疗和联合治疗，用于Claudin6阳性实体瘤的1/2期临床初步数据。

BNT211的联合用药治疗方案，即CAR-T+CARVac，首先输注低剂量的自体Claudin6 CAR-T细胞治疗BNT211，然后用CAR-T细胞扩增mRNA疫苗CARVac多次给药来提高CAR-T细胞的数目、持久性和活性。

▲ 图片来源：BioNTech

CARVac（CAR-T cell Amplifying RNA Vaccine）是一种携带抗原编码RNA的脂质体复合物（RNA-LPX），可与CAR-T疗法进行联用，解决CAR-T疗法面临的持久性、实体瘤、安全性等问题。

CARVac的设计利用了mRNA编码与CAR-T细胞相同的靶抗原，通过让抗原呈递细胞也表达相同的抗原，促进CAR-T的激活和扩增。同时，低剂量的CAR-T也可以限制其毒性和副作用。

▲ CARVac多次给药能够将CAR-T细胞数量维持在安全有效的治疗窗内（图片来源：Science）

总体而言，这些初步数据显示，Claudin6 CAR-T细胞疗法单药治疗，以及CAR-T+CAR-Vac联合治疗是安全的，并且对Claudin6阳性实体瘤患者显示出了有潜力的治疗效果。

二、mRNA的创新应用进展

2021年2月24日，《MIT Technology Review》发布了“全球十大突破性技术”名单，其中榜首即是mRNA疫苗。从2019年12月新冠爆发到2022年4月1号，全球新冠确诊已超4.8亿。新冠病毒的蔓延促进了mRNA疫苗的发展。mRNA疫苗在新冠疫苗开发方面的成功，也促进了其在各种传染病与肿瘤等治疗方面广阔的应用前景。

mRNA疫苗因为新冠而声名大噪，但在其他领域疾病中的应用前景也同样巨大，例如肿瘤治疗、自身免疫性疾病、其它传染病等。同时，也有越来越多基于mRNA的新技术展现出头角，使其应用潜力进一步扩大。以下提供了mRNA领域巨头BioNTech和Moderna近期公布的主要进展。

今年3月，Moderna公司宣布，其针对人类免疫缺陷病毒（HIV）的三聚体mRNA疫苗mRNA-1574的1期临床试验（HVTN 302）已经完成首例患者给药。

HVTN 302是一项开放标签、多中心、随机的1期临床试验（NCT05217641），旨在评估mRNA-1574的安全性和免疫原性。主要验证表达HIV衣壳蛋白三聚体的mRNA疫苗在未被感染的个体中具有良好的安全性和耐受性，并且可以激发针对HIV的中和抗体。

今年2月，Moderna公司宣布，数据和安全监测委员会（DSMB）已批准其预防呼吸道合胞病毒（RSV）的候选疫苗mRNA-1345开展关键性3期临床试验。此次DSMB的认可来自于对mRNA-1345的初步2期临床试验数据的独立审评。

mRNA-1345是一种编码RSV融合前F糖蛋白的疫苗，与融合后状态相比，可引起更高的中和抗体反应。mRNA-1345使用与Moderna的新冠疫苗相同的脂质纳米颗粒（LNP），包含优化的蛋白和密码子序列。

今年1月，BioNTech/辉瑞和Moderna公司分别公布了其mRNA疫苗在传染病领域开发方面的新进展。

1） 辉瑞和BioNTech宣布达成了一项新的合作协议，以开发一种带状疱疹mRNA疫苗。根据协议，双方将利用辉瑞专有的抗原技术和BioNTech的mRNA平台技术开发带状疱疹mRNA疫苗，临床试验将于2022年下半年开始。

▲ BioNTech mRNA传染病疫苗管线

2） Moderna公司宣布其治疗爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）的候选疫苗mRNA-1189已经完成1期临床试验的首例患者给药。mRNA-1189旨在预防EBV激发的传染性单核细胞增多症，并且潜在预防EBV感染。它由四种mRNA组成，并编码不同的EBV衣壳糖蛋白（gH，gL，gp42，gp220）。目前，全球尚无获批的EBV疫苗或预防传染性单核细胞增多症的疫苗。

三、mRNA疫苗技术关键原料-oligo-dT磁珠、SA磁珠

疫苗mRNA因为长度较大，为几千个核苷酸，而无法直接进行检测，因此需要将5’ cap和3’ poly(A)端酶切成短片段，酶切之后5’ cap和3’ poly(A)均可以通过纳米磁珠进行高通量、快速分离，这种纳米磁珠通常粒径在0.2-5μm之间。

测定加帽效率主要是通过将5’cap端与生物素标记的引物退火，然后将5’cap端酶切成小片段，通过SA磁珠捕获出biotin标记部分，然后将5’cap从磁珠表面洗脱，通过毛细管凝胶电泳或质谱法进行检测。

3’ PolyA尾的检测方法与5’加帽效率的检测方法类似，需要通过酶切的方式获得3’端的Poly A尾短链，然后利用Oligo dT磁珠分离纯化，再分别进行毛细管电泳或质谱准确分析其长度分布。

在mRNA的5’端加帽效率和3’加尾分布的检测过程中，都需要磁珠进行mRNA片段的富集。磁珠的性能影响到整个检测数据的准确性和可靠性，该过程中的磁珠一般需要如下的特征：

a) 非特异性吸附低；

b) 灵敏度高，磁珠表面具有丰富的结合位点；

c) RNA易洗脱，磁珠表面需要特殊的封闭；

d) 耐受有机溶剂，部分操作会使用95%乙醇，对磁珠的溶剂耐受性有很大的要求。