IF：34.915〡Biolinkedin® Anti-Flag Magnetic beads＆Anti-Flag Affinity gels在选择性自噬分子机制研究中的应用

自噬（Autophagy）是真核生物中一种高度保守的分解代谢过程，涉及到细胞器、大分子或入侵的微生物，隔离并转运至溶酶体进行降解。p62/SQSTM1（Sequestosome 1）是第一个被发现的，也是最重要的自噬受体，它具有与泛素（ubiquitin）和LC3相互作用的结构域，能结合泛素化修饰的蛋白，并运输到自噬体。

近日，Military MedicalResearch （IF 34.915）杂志上发表了《TRIM72-mediateddegradation of the short form of p62/ SQSTM1 rheostatically controls selectiveautophagy in human cells》论文，揭示了泛素连接酶TRIM72调控选择性自噬的分子机制。

在本研究中，研究者使用了Biolinkedin^®Anti-Flag affinity gels 进行免疫沉淀（immunoprecipitation，IP），检测p62S的泛素化修饰 (Fig.1f)。

同时，使用了Biolinkedin^®Anti-Flag Magnetic beads进行了免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation，Co-IP）实验，检测TRIM72与p62S的相互作用（Fig.S3a）

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全文解读

人的p62/SQSTM1基因通过可变剪接形成p62L和p6S两个转录本，它们广泛表达于多种人的细胞系。与 p62L蛋白相比，p62S缺失了N端的 1-84 个氨基酸（PB1 结构域内）。

用蛋白酶体抑制剂bortezomib (BTZ)处理细胞时，p62S 和 p62L 蛋白水平均上调，表明它们主要是通过泛素-蛋白酶体途径降解。p62L的蛋白稳态调控已被多篇文章报道，而p62S蛋白的稳态调控之前未见报道。通过酵母双杂交法，筛选到了特异性结合p62S，而与p62L没有相互作用的E3泛素连接酶TRIM72。进一步的实验证实TRIM72可以特异性结合、泛素化修饰并降解p62S。

尽管N端缺少PB1结构域，与p62L一样，p62S也能够高效的结合多泛素链修饰的底物，但却不能介导它们在溶酶体的降解。与p62L不同，p62S会抑制细胞的自噬，使细胞内的氧化蛋白增加，且不利于清除感染的沙门氏菌。当细胞表达较高多的E3泛素连接酶TRIM72时，p62S蛋白水平下降，细胞自噬上升。

总之，该研究揭示了一新的自噬调控机制，涉及到p62/SQSTM1的mRNA剪接、TRIM72介导的泛素化修饰信号与细胞自噬平衡的关系（Fig.1j），可为相关疾病的治疗提供了新的潜在干预靶点。

原文