Protein A磁珠Protein G磁珠Protein L磁珠Protein A/G磁珠Protein A琼脂糖凝胶Protein G琼脂糖凝胶Protein L琼脂糖凝胶Protein A/G琼脂糖凝胶Anti-HA磁珠Anti-Myc磁珠Anti-DYKDDDDK磁珠(原Flag磁珠)链霉亲和素磁珠Anti-DYKDDDDK琼脂糖凝胶(原Flag凝胶)Anti-GST磁珠Anti-His磁珠Anti-GFP磁珠伴刀豆蛋白A(ConA)磁珠Protein A琼脂糖磁珠Protein G琼脂糖磁珠Protein A/G琼脂糖磁珠免疫沉淀磁珠His蛋白纯化琼脂糖凝胶GST蛋白纯化琼脂糖凝胶His蛋白纯化琼脂糖磁珠GST蛋白纯化琼脂糖磁珠Protein A Plus 琼脂糖磁珠Protein G Plus 琼脂糖磁珠Protein A/G Plus 琼脂糖磁珠蛋白抗体纯化磁珠PCR产物提取磁珠Oligo-dT包被磁珠核酸提取纯化磁珠羟基磁珠氨基磁珠羧基磁珠醛基磁珠NHS磁珠基础磁珠Protein A免疫(共)沉淀试剂盒Protein G免疫(共)沉淀试剂盒经典Protein A/G免疫(共)沉淀试剂盒Anti-HA免疫(共)沉淀试剂盒Anti-Myc免疫(共)沉淀试剂盒Anti-DYKDDDDK免疫(共)沉淀试剂盒Anti-DYKDDDDK免疫(共)沉淀试剂盒(凝胶法)Anti-GST免疫(共)沉淀试剂盒Anti-His免疫(共)沉淀试剂盒Anti-GFP免疫(共)沉淀试剂盒基础免疫(共)沉淀试剂盒His Pull-down试剂盒GST Pull-down试剂盒分子互作试剂盒His标签蛋白纯化试剂盒GST标签蛋白纯化试剂盒蛋白纯化试剂盒mRNA纯化试剂盒基础mRNA纯化试剂盒核酸提取纯化试剂盒生物配体快速偶联试剂盒生物偶联试剂盒血浆/血清外泌体提取试剂盒(磁珠法)细胞上清外泌体提取试剂盒(磁珠法)尿液外泌体提取试剂盒(磁珠法)外泌体研究产品双排4孔 1.5mL磁力架双排8孔 1.5mL磁力架双排16孔 1.5mL磁力架双排4孔 15mL磁力架双排4孔 50mL磁力架八联排 0.2mL磁力架(PCR)双排八孔1.5mL磁力架(铝合金款)双排十六孔1.5mL磁力架(铝合金款)96孔PCR板磁力架(铝合金款)96孔酶标板磁力架(铝合金款)手持均质仪配套设备生物偶联技术高通量蛋白纯化外泌体定向改造IVD试剂研发服务磁珠应用外泌体专题纳米抗体神经科学领域新冠相关PROTAC技术翎因动态行业新闻优惠促销产品支持技术支持客户发表文章学习资源企业简介企业文化团队风采生产与质量联系我们
Lab  on  the Beads

敲黑板 — IP(免疫沉淀)实验抗体如何选?

作者:Biolinkedin


很多生物学实验都需要使用抗体,例如WBIPIF等等,不同的实验对于抗体的选择是有差异的,如果抗体选择不合理,实验的结果将很难达到理想效果。那么IP(免疫沉淀)实验如何选择抗体呢?来了解一下吧

一、在IP实验中,抗体需要通过识别抗原的构象表位并与靶蛋白结合沉淀出来,而只能识别线性表位的抗体则无法做到这一点。所以开始IP实验之前,一定要先确定所选抗体适用于IP实验。

Anti-HA tag Antibody 为例

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另外,一般IPWB在抗体稀释比上有不同,这一点也需要明确。

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二、尽量选择已发表高分文献中经常引用的品牌以及货号。

一般文献中报道的品牌货号产品已经过验证,再结合文章中的数据,择优选择。

三、所选抗体与结合蛋白Protein A/G的亲和力弱,无法将抗体与目的蛋白复合物沉淀下来。

由于不同物种的不同蛋白亚型与结合蛋白的亲和力都不相同,选择相应的结合蛋白才能保证实验顺利。可以根据下表来选择与所用抗体亲和力强的结合蛋白:

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如果IP所涉及目的蛋白带有相关标签,如Flag tagHA tag等。那么实验中,既可以选择IP级别的抗体并配套相关磁珠(Protein A/G Magnetic beads),也可以直接选用相关标签蛋白抗体磁珠,比如Biolinkedin®Anti-Flag Magnetic beads

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如果目前所涉及抗体实在无法满足IP实验需要,我们也可以考虑利用链霉亲和素-生物素系统(Streptavidin-Biotin System),将目的蛋白生物素化标记,并通过   Streptavidin Magnetic beads对目的蛋白进行免疫沉淀。

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四、Western Blot 55kD以及25kD出现条带。

多出来的两条,其实是IgG的重链和轻链WB实验上样之前,样品一般要煮沸变性并去除Protein A/G beads,缓冲液中的巯基乙醇会将抗体重链和轻链之间的二硫键破坏,使抗体分子变成55kD的重链分子和25kD的轻链分子。

IP实验抗体与后续用于Western Blot实验的抗体来源种属可以选择不同。如果IP抗体是鼠源的,那么后续WB的抗体可以选择兔源的。

图片4-1.jpg

五、单多克隆抗体的选择。

一般单克隆抗体特异性强,背景低,亲和力可能会低一点,检测抗原灵敏度可能也会略低一点;多克隆抗体特异性一般稍弱一些,抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性条带。抗体是多克隆还是单克隆,一般为了特异性结合会选单克隆,但如果蛋白丰富低或其他条件条带很难跑出来,可以买多克隆。



Biolinkedin今天就分享到这啦,有兴趣的小伙伴可以关注我们公众号,并与我们随时互动。

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