Protein A磁珠Protein G磁珠Protein L磁珠Protein A/G磁珠Protein A琼脂糖凝胶Protein G琼脂糖凝胶Protein L琼脂糖凝胶Protein A/G琼脂糖凝胶Anti-HA磁珠Anti-Myc磁珠Anti-DYKDDDDK磁珠(原Flag磁珠)链霉亲和素磁珠Anti-DYKDDDDK琼脂糖凝胶(原Flag凝胶)Anti-GST磁珠Anti-His磁珠Anti-GFP磁珠伴刀豆蛋白A(ConA)磁珠Protein A琼脂糖磁珠Protein G琼脂糖磁珠Protein A/G琼脂糖磁珠免疫沉淀磁珠His蛋白纯化琼脂糖凝胶GST蛋白纯化琼脂糖凝胶His蛋白纯化琼脂糖磁珠GST蛋白纯化琼脂糖磁珠Protein A Plus 琼脂糖磁珠Protein G Plus 琼脂糖磁珠Protein A/G Plus 琼脂糖磁珠蛋白抗体纯化磁珠PCR产物提取磁珠Oligo-dT包被磁珠核酸提取纯化磁珠羟基磁珠氨基磁珠羧基磁珠醛基磁珠NHS磁珠基础磁珠Protein A免疫(共)沉淀试剂盒Protein G免疫(共)沉淀试剂盒经典Protein A/G免疫(共)沉淀试剂盒Anti-HA免疫(共)沉淀试剂盒Anti-Myc免疫(共)沉淀试剂盒Anti-DYKDDDDK免疫(共)沉淀试剂盒Anti-DYKDDDDK免疫(共)沉淀试剂盒(凝胶法)Anti-GST免疫(共)沉淀试剂盒Anti-His免疫(共)沉淀试剂盒Anti-GFP免疫(共)沉淀试剂盒基础免疫(共)沉淀试剂盒His Pull-down试剂盒GST Pull-down试剂盒分子互作试剂盒His标签蛋白纯化试剂盒GST标签蛋白纯化试剂盒蛋白纯化试剂盒mRNA纯化试剂盒基础mRNA纯化试剂盒核酸提取纯化试剂盒生物配体快速偶联试剂盒生物偶联试剂盒血浆/血清外泌体提取试剂盒(磁珠法)细胞上清外泌体提取试剂盒(磁珠法)尿液外泌体提取试剂盒(磁珠法)外泌体研究产品双排4孔 1.5mL磁力架双排8孔 1.5mL磁力架双排16孔 1.5mL磁力架双排4孔 15mL磁力架双排4孔 50mL磁力架八联排 0.2mL磁力架(PCR)双排八孔1.5mL磁力架(铝合金款)双排十六孔1.5mL磁力架(铝合金款)96孔PCR板磁力架(铝合金款)96孔酶标板磁力架(铝合金款)手持均质仪配套设备生物偶联技术高通量蛋白纯化外泌体定向改造IVD试剂研发服务磁珠应用外泌体专题纳米抗体神经科学领域新冠相关PROTAC技术翎因动态行业新闻优惠促销产品支持技术支持客户发表文章学习资源企业简介企业文化团队风采生产与质量联系我们
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浅谈|蛋白制备纯化之缓冲液置换(小技巧篇)

作者:Bilinkedin

缓冲体系在蛋白制备纯化过程中非常重要,合适缓冲液能确保蛋白活性和结构稳定。为了满足蛋白后续纯化,往往需要对缓冲液进行置换。下面介绍几种常见的纯化场景,

场景一:针对分泌表达蛋白或抗体,其存在于培养基或腹水中,相对成分复杂,后续纯化需要置换缓冲体系,避免影响亲和纯化的效率。

场景二:有些蛋白经过亲和纯化后需要进行进一步纯化(如离子交换层析),在进行离子交换之前需要将盐离子降低或pH调整,此时需要置换缓冲液。

场景三:蛋白经过离子交换层析后,还需要进行下一步离子交换层析需要调整pH,此时需要置换缓冲液。

场景四:对于包涵体复性纯化,因含有变性剂(盐酸胍或尿素等)需要去除避免影响下游纯化,此时需要置换缓冲液。

针对上述情况,可采取如下常用方式:

常规方法主要有透析,超滤和凝胶过滤层析

A    .透析法

这种方法主要利用透析袋小分子能通过而蛋白质大分子不能透过半透膜的原理。一般12 - 24h透析2 - 4次可完成对缓冲液的置换。该方法实验室比较常用,样品回收率高,操作简单,成本低廉。

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透析袋的选择:

1.1 首先确定透析袋的分子量

在选择适合截留分子量之前,首先要明确:欲保留在透析袋中的样品和想要除去的杂质的分子量。

1.2 选择普通型,再生型或者纤维素透析袋

确定好分子量之后,根据实际情况,样品溶剂等,选择透析袋。

1.3正确选择扁平宽度

透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快;较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用,建议使用总长(包括闭合夹和顶部空间)为大约10 - 15cm的透析袋。

B.超滤

超滤属于膜分离技术,主要借助超滤膜完成分离介质的作用,以超滤膜两侧的压力差为动力,结合料液中各组分在高分子膜中传输的不同点,对原有的物质进行分析,分级和纯化,从而达到脱盐浓缩的作用。

超滤法可以选择超滤管,超滤杯,以及工业级的超滤系统。

实验室超滤管的选择:

超滤离心管的选择主要根据要截留那部分物质,选择比最小分子量小的,如果要截留35 KD的蛋白,就可以选择10 kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10 kD左右,则可以用截留分子量3 kD的超滤管。

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C凝胶过滤层析

主要利用不同的溶质因不同程度进入介质而在液相中停留时间不同,凝胶的孔径和溶质分子大小的关系决定了层析时该溶质在层析柱中的保留时间,不同的物质因保留时间不同而分离。比如Sephadex G-25 凝胶过滤介质应用于生物大分子的脱盐和缓冲液置换,特别是在离子交换及亲和层析后脱盐及缓冲液置换中比较常用。



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