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LAB  ON THE MAGNETICBEADS
产品详情
Anti-HA  Magnetic Beads
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Anti-HA  Magnetic Beads
货号: L1009
规格: 1mL
价格:
1999.00
产品详情

产品描述

Anti-HA免疫磁珠由高质量的鼠源单克隆Anti-HA抗体与纳米级磁珠共价偶联制备,与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比,该产品具有更多的抗体结合位点,磁珠使用量更少,非特异性结合率低,可便捷高效地进行免疫沉淀实验。纳米级磁珠提供的超大比表面积,大幅缩短抗体与抗原吸附所需的平衡时间,10分钟内即可完成抗体吸附过程,30分钟内完成抗原沉淀操作。简短的操作时间避免长时间操作造成目标蛋白被水解,保证了目标蛋白的活性及蛋白复合物的完整性。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应和少量蛋白质的纯化。

产品特性

项目

特性

抗体亚型

鼠源IgG

适用范围

免疫沉淀(IP),HA   tag蛋白纯化

推荐使用体积

IP: 500μl细胞裂解液使用10μL磁珠

融合蛋白结合容量

大于1.1 mg HA tagged protein/mL 磁珠

储存条件

pH 6-8,4oC长期稳定,禁止产品冻结。

使用说明

磁珠的准备

1. 用移液枪轻柔吹打重悬Anti-HA免疫磁珠,转移10μL混合液到新的离心管中。

2. 加入500μLTBS,用移液枪轻柔吹打重悬Anti-HA免疫磁珠,磁力架上静置10s后, 去除上清,重复上述步骤2次。   注意:多个样品时,磁珠预处理后再分装到各个反应管中。

样品的结合

3. 在上述沉淀中加入500μL细胞裂解液,室温缓慢孵育2小时或者4°C条件下过夜。

4. 磁力架上静置10s后,将上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测HA-tag蛋白是否存在残留)。

注意:结合过程中,磁珠可能会出现聚团或呈片状,属于正常现象,不会影响实验结果。

洗涤

5. 使用0.5 mL TBS缓冲液洗涤第4步中的沉淀。

6. 重复洗涤大约3次,直到洗涤后的上清液中OD280小于0.05为止。

注意:如上清液的OD280大于0.05,适当增加洗涤次数。

蛋白洗脱

7. 根据下游用途选择洗脱方法。对于直接检测目的蛋白的情况,在上述所得沉淀中加入50μL 1×蛋白上样缓冲液,煮沸5min,冷却至室温并在磁力架上静置10s。

8. 取上清进行SDS-PAGE检测。

常见问题及对策

常见问题

原因

解决方法

高的背景条带

蛋白非特异结合到抗体,磁珠或EP管上洗涤次数不够

对裂解液进行预处理去除非特异蛋白; 在最后一次洗涤前, 转移整个样品到新的EP管中然后进行离心。

洗涤次数不够

增加洗涤的时间和次数。

无蛋白条带

HA标签蛋白没有表达

确保目的蛋白带有HA标签; 制备新鲜的裂解液; 使用恰当的蛋白酶抑制剂。

孵育时间不足

增加孵育时间。

样品中存在干扰物质

裂解液中存在高浓度的DTT,2-mercaptoethanol或者其他的还原剂。


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